Полная версия

Главная arrow Математика, химия, физика arrow Биоорганическая химия

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

Определение N-концевых и С-концевых аминокислот.

Пептиды, выделенные после частичного гидролиза, анализируют на N- и С-концевые остатки аминокислот, используя химические и ферментативные методы. С-Концевые остатки пептидов отщепляют с помощью ферментов карбоксипсптидаз, N-концевые - с помощью аминопептидаз.

Существует несколько химических методов анализа N-концевых аминокислот. Один из них — метод Эдмана, или фенилизотиоцианатный (фенилтиоги- дантоиновый), был предложен П. Эдманом в 1950 г.

Метод Эдмана заключается во взаимодействии пептида с фенилизотиоциа- натом с последующим кислотным отщеплением фенилтиогидантиона:

Далее фенилтиогидантоиновыс производные аминокислот идентифицируют методами тонкослойной или газожидкостной хроматографии. При отщеплении N-концевой аминокислоты остальная часть пептида не разрушается и операции по отщеплению можно повторять.

В настоящее время последовательное запрограммированное отщепление N-концевых аминокислот по методу Эдмана используется в специальном приборе — ссквснаторс (от англ, sequence — последовательность; П. Эдман, Дж. Брэгг, 1967 г.). Таким способом удастся определить последовательность 30-50 остатков аминокислот.

Кроме того, первичную структуру белков определяют путем расшифровки нуклеотидной последовательности соответствующих генов. Наибольшую надежность результатов обеспечивает сочетание обоих методов определения первичной структуры полипептидной цепи.

В изучении первичной структуры белков достигнут значительный прогресс, ежегодно устанавливается полная структура не менее 100 белков. Аминокислотная последовательность расшифрована для ферментов, содержащих 1021 остаток аминокислот ((3-галактозидаза).

Наряду с достижениями, в структурной химии белка имеются и определенные проблемы. В частности, наибольшие сложности возникают при изучении первичной структуры мембранных белков и белков-регуляторов, выделяемых в ничтожно малых количествах, а также белков с очень большой молекулярной массой (больше 100 тыс.). Так, мембранные белки обладают рядом необычных свойств, в их числе высокое сродство к липидам и гидрофобность, которые приводят к практически полной их нерастворимости в водных средах. Кроме того, пептидные фрагменты, образующиеся при их гидролизе, также плохо растворяются и обладают повышенной склонностью к агрегации.

Изучение структуры белков-регуляторов, синтезирующихся в клетке в ничтожно малых количествах, потребовало разработки более чувствительных методов идентификации производных аминокислот. В ряде лабораторий с этой целью используют радиоактивную метку. Добавление меченых аминокислот в питательную среду, на которой выращивается культура клеток, являющаяся источником исследуемого белка, позволяет в последующем путем измерения радиоактивности продуктов, образующихся в ссквснаторс, безошибочно определять место той или иной аминокислоты в полипептидной цепи.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>