Полная версия

Главная arrow Медицина arrow Вирусология и биотехнология

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

ГЛАВНЫЙ ОПЫТ РИГА

Реакцию ставят в пробирках или в лунках плексигласовых панелей. В последнее время РНГА ставят микрометодом, используя аппарат Такачи (рис. 31), Титертек или автоматические пипетки (1-, 8-, 12- канальные) с изменяющимися объемами (рис. 32). Исследуемые и контрольные сыворотки прогревают при 56 °С 30 мин.

Аппарат Такачи

Рисунок 31 - Аппарат Такачи

Исследуемую сыворотку разводят двукратно в объеме 0,2 мл физиологическим раствором с pH 7,2-7,4, содержащим 1% нормальной сыворотки кролика, затем к каждому разведению сыворотки добавляют по 0,2 мл сенсибилизированных антигеном эритроцитов.

Многоканальная автоматическая пипетка

Рисунок 32 - Многоканальная автоматическая пипетка: 1 - регулятор объема; 2 - наконечники; 3 - рабочая рукоятка; 4 - сбрасыватель наконечников

Смесь встряхивают и выдерживают при комнатной температуре. Учет проводят через 2-3 ч по осаждению эритроцитов в контроле. Опыт сопровождают следующими контролями:

  • 1) на спонтанную гемагглютинацию эритроцитарного антигена (сенсибилизированные эритроциты + физиологический раствор с 1 % кроличьей сыворотки);
  • 2) на активность сенсибилизированных эритроцитов (сенсибилизированные эритроциты + положительная сыворотка);
  • 3) на специфичность сенсибилизированных эритроцитов (сенсибилизированные эритроциты + нормальная сыворотка или другая негомологичная для данного антигена сыворотка);
  • 4) на отсутствие в сыворотках неспецифических гемагглютини- нов (исследуемые сыворотки + несенсибилизированные эритроциты).

Результаты реакции оценивают по четырехбалльной шкале: (+++) - агглютинированные эритроциты образуют перевернутый «зонтик» с неровными краями; (++) - по краю агглютинированных эритроцитов намечается тонкое кольцо из неагглютинированных эритроцитов; (+) - по краю агглютинированных эритроцитов располагается широкое кольцо из неагглютинированных эритроцитов; (-) - эритроциты оседают на дно в виде диска или колечка - отрицательный результат.

При положительной реакции эритроциты равномерно распределяются по дну пробирки или луночки в виде зонтика, а при отрицательной - оседают в виде компактного осадка или колечка в центре луночки. Достоверные результаты получают при отсутствии гемагг- лютинации: испытуемой сыворотки с несенсибилизированными эритроцитами, диагностикума с заведомо отрицательной сывороткой, при положительной реакции диагностикума с заведомо положительной сывороткой.

За титр антител в сыворотке принимают наибольшее ее разведение, которое еще вызывает агглютинацию сенсибилизированных эритроцитов.

Таким образом, РНГА позволяет решать следующие диагностические задачи: а) обнаруживать антитела и определять их титр в сыворотках крови. Для этого используют эритроциты, сенсибилизированные вирусом; б) обнаруживать и идентифицировать вирусный антиген. Для этого используют эритроциты, сенсибилизированные антителами.

Достоинства РНГА: высокая чувствительность (по этому показателю она превосходит РДП, РСК и близка к иммуноферментному методу), простота техники постановки и быстрота ответа (через 2-3 ч). Однако есть и недостатки. Это трудности в приготовлении стабильных эритроцитарных диагностикумов (большая зависимость от чистоты компонентов, необходимость подбора режима сенсибилизации для каждого вида вируса и т. д.).

Самостоятельная работа студентов

  • а) подготовить микропанели, петли и пипетки для РНГА;
  • б) поставить РИГА с целью определения титра антител в сыворотке крови теленка к вирусу адено- или ИРТ;
  • в) провести учет результатов реакции.

Подведение итогов занятия Задание к следующему занятию Контрольные вопросы

  • 1 В чем отличие непрямой гемагглютинации от прямой?
  • 2 В чем принцип РНГ А?
  • 3 Каково практическое использование РНГ А?
 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>