Полная версия

Главная arrow Медицина arrow Вирусология и биотехнология

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

МЕТОДИКА ПОСТАНОВКИ РИГА

Она включает: а) приготовление сенсибилизированных эритроцитов (подготовка эритроцитов, их фиксация, танизация и сенсибилизация); б) постановку главного опыта РИГА. Обычно в ветеринарных лабораториях ставят только главный опыт, а сенсибилизированные эритроциты готовят на предприятиях биологической промышленности.

Процесс приготовления сенсибилизированных эритроцитов (эритроцитарного диагностикума):

  • 1) подготовка эритроцитов. Для этой цели наиболее широко применяют эритроциты барана и человека. В настоящее время чаще применяют эритроциты птиц - кур, индеек, уток; приготовленные на них диагностикумы быстрее оседают, что позволяет сократить сроки исследования без потери чувствительности. От соответствующего вида животного берут кровь общепринятым методом. Дефибринирован- ную кровь трижды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия при центрифугировании;
  • 2) фиксация эритроцитов. Преимущество фиксированных эритроцитов в том, что они могут быть заготовлены впрок и длительное время храниться в суспензии, не подвергаясь гемолизу. Для фиксации эритроцитов чаще всего используют формальдегид, глутаровый или акриловый альдегиды. Методики фиксации эритроцитов различны. Одна из них: 50-процентную взвесь отмытых эритроцитов соединяют с равным объемом 50-процентного формалина и после двухчасового контакта при 37 °С с периодическим встряхиванием эритроциты 3 раза отмывают 0,15 M/NaCl (pH 7,2);
  • 3) танизация эритроцитов. Механизм действия танина на эритроциты малоизучен. Однако при этом достигается главное - танизи- рованные эритроциты обладают значительно большей сорбционной емкостью белков. Танизацию формалинизированных эритроцитов осуществляют путем смешивания равных объемов 3-процентной взвеси эритроцитов и раствора танина (1 : 20 000). После 10-15-минутного контакта при 37 °С смесь центрифугируют, осадок трехкратно промывают фосфатным буфером (pH 7,2);
  • 4) сенсибилизация эритроцитов. 10-процентную концентрацию эритроцитов на 0,15 М фосфатном буфере (pH 6,4) смешивают с равным объемом вируссодержащей жидкости. Смесь выдерживают 60 мин при 37 °С, периодически встряхивая, затем центрифугируют и 2-3 раза отмывают. Осадок сенсибилизированных эритроцитов разводят до 1-процентной концентрации в фосфатном буферном растворе (pH 7,2), содержащем 1 % нормальной кроличьей сыворотки (для стабилизации эритроцитов). Полученные таким образом сенсибилизированные эритроциты используют в РИГ А.

Необходимо отметить, что оптимальную сенсибилизирующую дозу антигена (для разных вирусов) подбирают эмпирически в пробных опытах сенсибилизации эритроцитов.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>