Полная версия

Главная arrow Медицина arrow Вирусология и биотехнология

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

ПРИНЦИП РТГА

Состоит в том, что в пробирке смешивают равные объемы сыворотки крови и суспензии вируса и после экспозиции определяют, сохранился ли в смеси вирус, путем добавления суспензии эритроцитов. Агглютинация эритроцитов указывает на наличие, а отсутствие ге- магглютинации - на отсутствие вируса в смеси. Исчезновение вируса из смеси вирус + сыворотка расценивается как признак взаимодействия антител сыворотки и вируса.

Но антитела с антигенами взаимодействуют в строго определенных количественных соотношениях. Поэтому, для того чтобы определенное количество вируса было лишено гемагглютинирующей способности, требуется определенный минимум антител, а так как один из компонентов РТГА всегда неизвестен, приходится реакцию ставить в ряду пробирок с различными дозами антител и одинаковыми дозами вируса или наоборот. Это достигается тем, что берут или разные разведения сыворотки и одно и то же разведение вируса, или разные разведения вируса и одно и то же разведение сыворотки.

РТГА позволяет решать следующие задачи: определять титр антител к гемагглютинирующему вирусу в сыворотке; идентифицировать неизвестный гемагглютинирующий вирус по известным сывороткам; установить степень антигенного родства двух вирусов.

Достоинства РТГА: простота техники, быстрота, не требуется стерильной работы, специфичность, дешевизна. Недостаток: РТГА возможна только с гемагглютинирующими вирусами.

Принцип титрования антител в РТГА состоит в следующем:

  • - готовят ряд последовательных (обычно 2-кратных) разведений исследуемой сыворотки в одинаковых объемах (чаще по 0,25 или 0,2 мл);
  • - к каждому разведению добавляют такие же объемы гомологичного вируса в титре 4 ГАЕ;
  • - смеси выдерживают определенное время при определенной температуре (для вируса ньюкаслской болезни 40-60 мин при комнатной температуре);
  • - ко всем смесям добавляют равные объемы 1-процентной суспензии отмытых эритроцитов;
  • - после экспозиции оценивают гемагглютинацию в каждой смеси в крестах.

В реакции предусматриваются контроли сыворотки, вируса и эритроцитов.

То наивысшее разведение сыворотки, которое еще полностью тормозит гемагглютинацию, принимается за показатель титра антител в этой сыворотке.

Задания

Определить в РТГА титр антител к вирусу ньюкаслской болезни в сыворотке крови кролика.

Самостоятельная работа студентов По схеме постановки РТГ А:

  • а) получение 2-кратных разведений сыворотки (по 0,2 мл);
  • б) добавление вируса в титре 4 ГАЕ (по 0,2 мл);
  • в) контакт вируса с сывороткой 40-60 мин;
  • в) розлив суспензии эритроцитов;
  • г) экспозиция (30-40 мин);
  • д) учет и запись результатов титрования антител в РТГ А.

Подведение итогов занятия Задание к следующему занятию Контрольные вопросы

  • 1 Что такое антигены и антитела?
  • 2 Что такое серологические реакции и для чего они используются?
  • 3 В чем принцип и использование РТГ А?
  • 4 Что вы знаете о модификации РТГ А?
 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>