Полная версия

Главная arrow Медицина arrow Антиоксиданты растений

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

Оценка антиоксидантной активности по гашению свободных радикалов

Оценка антиоксидантной активности по степени гашения (по обесцвечиванию) долгоживущего окрашенного радикала АВТ8”

Рис. 35. Оценка антиоксидантной активности по степени гашения (по обесцвечиванию) долгоживущего окрашенного радикала АВТ8”+

Среди тестов на гашение свободных радикалов (то есть их превращение в нерадикальные соединения) самым распространенным является ТЕАС — Trolox equivalent antioxidant capacity. Антиоксидант добавляют к системе, генерирующей свободные радикалы. Степень гашения свободных радикалов изучаемым антиоксидантом сравнивают с эффектом 1 ммоля стандартного антиоксиданта — тролокса (рис. 35). Тролокс представляет собой водорастворимый аналог жирорастворимых витаминов Е.

Измеряется способность антиоксиданта гасить долгоживущий окрашенный радикал ABTS*+ (2,2'-азино-бис(3-этилбенз- тиазолино-6-сульфонат)) с характерной полосой поглощения света при 734 нм. В присутствии антиоксиданта происходит следующая реакция (рис. 35): ABTS*+ (окрашенный) -»ABTS (бесцветный). Таким образом антиоксиданты вызывают выцветание раствора этого стабильного радикала.

Раствор ABTS*+ получают следующим способом: смешивают растворы ABTS и персульфата калия так, чтобы в смеси их концентрация составила 7,0 и 2,45 мМ, соответственно. Под действием персульфата происходит окисление ABTS и раствор постепенно приобретает насыщенный сине-зеленый цвет, с двумя максимумами поглощения:

405 и 734 нм. Через 12-16 ч раствор можно использовать. Его разбавляют этанолом для снижения уровня экстинкции при 734 нм до 0,700. Затем добавляют контрольный раствор или раствор, содержащий антиоксиданты.

ТЕАС позволяет тестировать водные, хлороформенные, ацетоновые экстракты, содержащие антиоксиданты. Антиоксидантную активность выражают в эквивалентах тролокса, например ммоль/кг ткани или ммоль/л экстракта или напитка. Можно использовать АВТБ-тест в чистом виде, не относя активность изучаемого антиоксиданта к активности тролокса.

Способность антиоксиданта гасить свободные радикалы часто оценивается с помощью фикоэритринового теста. В этом тесте используются флуоресцентные белки красных водорослей: (3-фикоэритрин и Л-фикоэритрин. Флуоресценцию этих белков способны гасить пероксил-радикалы, которые генерируются при окислительной декомпозиции 2,2'-азобис(2-амидинопропан)дигидрохлорида (ААРН, или АВАР).

Оценка антиоксидантной активности по степени гашения флуоресценции, вызываемой окислением 2',7'-дихлорфлуоресцина

Рис. 36. Оценка антиоксидантной активности по степени гашения флуоресценции, вызываемой окислением 2',7'-дихлорфлуоресцина

Оценка антиоксидантной активности методом электронного парамагнитного резонанса с использованием долгоживущего свободного радикала

Рис. 37. Оценка антиоксидантной активности методом электронного парамагнитного резонанса с использованием долгоживущего свободного радикала

Декомпозиция АВАР происходит при его окислении перекисью водорода, катализируемом пероксидазой хрена. Антиоксиданты, убирая пероксил-радикалы, препятствуют гашению флуоресценции фикоэритринов. С помощью пероксил-радикалов, генерируемых при окислении АВАР или в другой реакции, можно возбуждать хемилюминесценцию люминола или флуоресценцию 2',7'-дихлорфлуресцина, окисляя его до флуоресцирующего 2',7'-дихлорфлуоресцеина (рис. 36). Эти тесты используются так же широко, как и фикоэритриновый тест.

О способности антиоксиданта гасить свободные радикалы можно судить, используя метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). В основе метода ЭПР лежит поглощение электромагнитного излучения радиодиапазона неспаренными электронами, находящимися в магнитном поле. Данным методом эффективно измеряются только долгоживущие свободные радикалы. Такие радикалы возникают при окислении веществ, называемых «ловушками свободных радикалов». Например, в качестве ловушки синглетного кислорода часто используется тетраметил-4-пиперидон, который, взаимодействуя с ’02, превращается в долгоживущий свободный радикал тетраметил-4-пиперидон-М-оксил (рис. 37) с характерным спектром ЭПР. В системе, генерирующей свободные радикалы, сила ЭПР сигнала возрастает, а под действием антиоксидантов — снижается.

Оценка антиоксидантной активности по восстановительной активности

В группе тестов, основанных на измерении восстановительной способности антиоксидантов, наиболее распространен FRAP (ferric reducing antioxidant power) тест. Измеряется способность антиоксиданта восстанавливать в кислой среде комплекс трехвалентного железа с трипиридилтриазином Fe(TPTZ)3+ до двухвалентного комплекса Fe(TPTZ)2+, имеющего интенсивный синий цвет, с максимумом поглощения при 593 нм.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>