Полная версия

Главная arrow Медицина arrow Антиоксиданты растений

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

Определение антиоксидантной активности по подавлению процессов окисления

Тестами данной группы оценивают способность антиоксиданта замедлять окисление субстрата. Но какой выбрать субстрат? Он может быть естественным (растительное масло, например) или искусственным — химическим веществом, окисление которого сопровождается цветной реакцией. Где определять активность антиоксиданта? Большинство тестов позволяет оценить активность in vitro, но есть тесты, направленные на определение активности in vivo. Наконец, на какой стадии процесса окисления субстрата оценивать тормозящее действие антиоксиданта, ранней или поздней? Разные ответы на эти три вопроса лежат в основе разнообразия тестов данной группы.

Самый распространенный метод состоит в измерении динамики снижения веса масла при его нагревании. Повышенная температура позволяет сократить время тестирования, так как она ускоряет не только пероксидацию липидов, но и испарение летучих продуктов этой пероксидации (короткоцепочечных углеводородов, альдегидов, кетонов), приводящее к постепенному снижению веса нагреваемого масла. В присутствии антиоксидантов снижение веса масла происходит менее интенсивно. В качестве субстратов используются животный жир, растительное масло, а также искусственный субстрат — метиллинолеат (метиловый эфир линолевой кислоты). Этим методом, например, показано, что экстракт ягод винограда, добавленный в рафинированное соевое масло, может вдвое замедлить потерю веса масла при нагревании.

Более чувствителен метод PV (peroxide value), основанный на определении пе- роксидного числа в липидах, окисление которых ускорено нагреванием до 40-50 °С или иными способами. Пероксидное число — это удельное содержание LOOL, LOOH и LOO в масле (LH), выраженное в мг-экв пероксидного кислорода (О) в пересчете на 1 кг масла. Измерение обычно осуществляется в реакции окисления йода липидными перекисями:

По окончании реакции молекулярный йод титруется стандартным тиосульфатным раствором с использованием крахмала в качестве индикатора завершения процесса титрования:

Когда в среде не остается молекулярного йода, то исчезает синяя окраска, обусловленная комплексированием молекулярного йода крахмалом. Растворимый крахмал добавляют в самом конце титрования. Иначе он, связывая I, с образованием комплекса синего цвета, затрудняет взаимодействие I, с тиосульфатом.

Пероксидное число — не очень надежный показатель, так как пероксиды нестабильны и интенсивное окисление липидов может происходить без их накопления. Кроме того, молекулярный йод может включаться в липиды, насыщая двойные связи жирных кислот. Поэтому с помощью молекулярного йода можно также тестировать степень ненасыщенности жирных кислот.

Широко применяется тест, основанный на определении диеновых конъюгатов (—С=С—С=С—)• В 1931 г. Альберт Джиллам и соавторы показали, что у природных жиров при хранении постепенно возрастает поглощение ультрафиолета при 230- 235 нм, а в 1933 г. было доказано, что этот пик поглощения обусловлен диеновыми конъюгированными связями. Метод был разработан в 1960-х годах. Обычно этим

Оценка степени пероксидации липидов по скорости образования соединений, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой

Рис. 34. Оценка степени пероксидации липидов по скорости образования соединений, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой

методом определяют окисление РСТА,

ускоряя его тем или иным способом, например нагреванием. Однако в живых организмах очень много веществ, поглощающих УФ с длиной волны 230- 235 нм. Поэтому этот метод можно применять только к липидным экстрактам, очищенным от хлорофилла, нуклеиновых кислот, белков. Тестируемый антиоксидантный экстракт, конечно же, не должен содержать веществ, поглощающих свет в этой области спектра.

TBARS-тест (thiobarbituric acid reactive substances) состоит в выявлении соединений, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТВА). Среди продуктов пероксидации липидов только малоновый диальдегид реагирует с ТВА с образованием флуоресцентного соединения розового цвета, имеющего пик поглощения при 532-535 нм (рис. 34). Для тестирования обычно используется водная эмульсия линоленовой кислоты с детергентом (додецилсульфат натрия или TWEEN). Для улучшения перемешивания с водорастворимым антиоксидантом в смесь также добавляют этанол. Далее производится форсированное окисление субстрата (± антиоксидант), по окончании которого определяются TBARS. Для построения калибровочной кривой используется 1,1,3,3-тетраметоксипропан. Метод TBARS позволяет лишь приблизительно оценить уровень пероксидации липидов, так как доля малонового диальдегида среди конечных продуктов пероксидации липидов может быть различной.

Ряд методов базируется на определении других конечных продуктов окисления липидов, например 2-гексеналя (см. рис. 16). Гексеналь — один из основных конечных продуктов пероксидации липидов, определяющий запах прогорклого масла. Этот запах появляется, когда содержание гексеналя достигает 1 мг на 100 г масла. Кроме того, часто измеряют этан и пентан, например, в выдыхаемом человеком или животным воздухе. Эти вещества идентифицируют с помощью газовой хроматографии.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>