Полная версия

Главная arrow Товароведение arrow Пищевая микробиология: микробиологическая безопасность сырья и продуктов животного и растительного происхождения

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

РУЧНЫЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ

К ручным методам идентификации микроорганизмов относят: систему индикаторных бумажек, наборы мультимикротестов, метод хроматографии.

Ручные тесты, применяемые для индикации и идентификации микроорганизмов, важны для медицинской микробиологии и широко используются в санитарной микробиологии. Их постановка требует соблюдения стандартных условий проведения.

В последние десятилетия разработаны различные тест-системы: API-20E, Enterotube, Mycotube, Patho-Tec, СИБ, ПБДЭ и др. Система Enterotube представляет собой пластиковую камеру с 12 ячейками, содержащими окрашенные диагностические среды. Засев всех сред производится поступательно-вращательными движениями через камеру петли с посевным материалом. Инкубацию проводят в течение 24 ч при 37°С. О положительном или отрицательном результате теста судят по изменению цвета среды, разрыву агара (тест на газообразование) или после введения специальных реактивов (тест на образование индола, реакция Вогес—Проскауэра). Каждый признак обозначают определенной цифрой, поэтому полученные данные можно ввести в компьютер с соответствующей программой и получить ответ о таксономическом положении исследуемого штамма.

Система индикаторных бумажек (СИБ). Она представляет собой диски, пропитанные различными питательными средами. Эти специальные диски можно вносить в пробирки с бактериями или предварительно вкладывать в лунки планшетов, в которые вносят исследуемые культуры микроорганизмов. В частности, используют наборы дисков фирм Minitek (Enterobacteriaceae) и Minitek (Neisseria) для идентификации энтеробактерий и нейссерий. Способ позволяет получить результаты через 4 ч инкубации при 37°С.

Наборы мультимикротестов. Они представляют собой планшеты из пластика с лунками. В лунках располагаются питательные субстраты с индикаторами продуктов метаболизма бактерий. В лунки помещают суспензии изучаемых бактерий и термостатируют. Для идентификации гемофилов, энтеробактерий, листерий, стафилококков и др. используют тесты RapID NH, которые позволяют получить ответ не позднее 4—8 ч.

Серологические методы идентификации бактерий. С их помощью, используя специфические антитела, выявляют бактериальные антигены. Чаще всего в настоящее время пользуются методами ИФА-твердофазным и латекс-агглютинации.

Иммуномагнитное разделение. В основу метода положено использование активированных парамагнитных частиц размером порядка 2—3 мкм, которые покрываются антителами путем выдерживания при пониженной температуре до 24 ч. После инкубации не- связавшиеся антитела отмывают. После такой обработки частицы, покрытые антителами, добавляют к суспендированной пробе продукта питания, предположительно содержащей антигены, к которым специфичны антитела частиц (токсины или целые клетки в случае грамотрицательных бактерий). После добавления частиц пробу инкубируют при нормальной температуре от нескольких минут до нескольких часов, чтобы антитела связались с антигеном. Образованные комплексы собирают магнитом, после чего элюируют антиген и подсчитывают количество связавшихся частиц. Элюированный и сконцентрированный антиген может быть подвергнут другим методам анализа. Так, в одном из исследований им- муномагнитное разделение было сопряжено с проточной цитометрией для установления присутствия в пробе одного из штаммов Е. coli. После отмывки от парамагнитных частиц клетки были помечены флуоресцентными антителами, что позволило подсчитать их количество с помощью проточной цитометрии. Этот метод обладает чувствительностью и позволяет обнаружить примерно 10 КОЕ в пробе говяжьего фарша.

Хроматографические методы. С целью индикации и идентификации микроорганизмов нередко используют хроматографические методы. В объектах исследования определяют химический состав клеточной стенки и некоторые метаболиты микроорганизмов, причем как промежуточные, так и уникальные. Чаще всего у бактерий определяют короткоцепочечные жирные и тейхоевые кислоты, миколевую кислоту, используя метод газожидкостной хроматографии.

Нередко пользуются тонкослойной хроматографией. Содержание этих веществ у различных родов бактерий постоянное, и это явление позволяет идентифицировать виды.

Различия в составе липидов используют для идентификации бактерий на уровне рода и даже вида. Однако этот метод имеет определенные ограничения, поскольку содержание жирных кислот в клетках может зависеть от условий культивирования и возраста культуры.

В систематике некоторых бактерий учитывается состав хинонов и других переносчиков электронов, а также пигментов.

Важная информация о взаимном родстве бактерий может быть получена при изучении клеточных белков — продуктов трансляции генов. На основании изучения мембранных, рибосомных, суммарных клеточных белков, а также отдельных ферментов сформировалось новое направление — белковая таксономия. Спектры ри- босомных белков относятся к числу наиболее стабильных и используются для идентификации бактерий на уровне семейства или порядка. Спектры мембранных белков могут отражать родовые, видовые и даже внутривидовые различия. Однако характеристики химических соединений клетки не могут использоваться для идентификации бактерий изолированно от других данных, описывающих фенотип, поскольку нет критерия оценки значимости фенотипических признаков.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>