Получение и исследование пунктата костного мозга, селезенки, лимфатических узлов
Цель занятия. Освоить технику получения и методы исследования пунктата костного мозга, лимфатических узлов и селезенки.
Объекты исследования и оборудование. Пунктаты костного мозга, селезенки, лимфатического узла.
Микроскопы, 11-клавишные счетчики, иглы ИС-2, шприцы, ножницы, носовые щипцы, грелки резиновые с горячей водой, стекла предметные и шлифованные, спирт, эфир, 5%-й спиртовой раствор йода, иммерсионное масло, вата.
В постэмбриональный период кроветворение осуществляется в основном в костном мозге, селезенке и лимфатических узлах (см. пв. вкл., рис. 20—21).
Получение и исследование костномозгового (стернального) пунктата. Костномозговой пунктат чаще получают из грудной кости (рис. 7.12). У крупного рогатого скота, лошадей, ослов, мулов эту операцию выполняют в станке, без повала, но хорошо фиксируют голову животного. Свиней, овец, верблюдов, коз и собак фиксируют в положении лежа на боку. Рекомендуют применять анестезию (но- вокаиновую блокаду). В области 2—3-го сегмента грудной кости выстригают шерсть, кожу дезинфицируют 70%-м спиртом.
Рис. 7.12. Получение стернального пунктата: а — игла ИС-2 для костномозговой пункции: 1 — рукоятка;
2 — иглодержатель; 3 — игла; 4 — мандрен; б — игла В.С. Кондратьева, С.П. Ковалева: 1 — игла; 2 — мандрен с «пуговкой»; в — пункция грудной кости у крупного рогатого скота
Используют шприц вместимостью 20 мл, иглу ИС-2 или иглу конструкции В.С. Кондратьева, С.П. Ковалева. Инструменты стерилизуют кипячением, высушивают в термостате и перед получением пунктата увлажняют раствором гепарина или 3,8%-м раствором цитрата натрия.
Иглу вводят снизу вверх, отступив от середины сегмента в сторону на 1—2 см. Проколов кожу, подкожную клетчатку, слой грудных мышц, достигают грудной кости. Применив некоторое усилие, прокалывают надкостницу, компактную часть кости и попадают в губчатую часть сегмента (при этом ощущается своеобразный хруст). Извлекают ман- дрен, присоединяют шприц и энергично аспирируют костный мозг.
Пунктат берут в объеме не более 0,2-0,3 мл, чтобы избежать примеси большого количества крови. Как только в шприце появился пунктат, взятие пробы заканчивают. В заключение место прокола вновь обрабатывают 70%-м спиртом.
Полученный пунктат помещают на парафинированное часовое стекло и сразу готовят мазки на подогретых предметных стеклах. Мазки высушивают, фиксируют и окрашивают по методу Паппенгейма. Чтобы определить процентное соотношение клеточных элементов в костном мозге (вывести миелограмму) (табл. 7.4), подсчитывают 500—1000 клеток (лучше в той части, где мазок не очень густой).
Количество гемоглобина определяют по общепринятой методике. Чтобы подсчитать эритроциты в 1 · 10'3 мл пробы, в пробирку, содержащую 4 мл изотонического раствора хлорида натрия, пипеткой от гемометра Сали добавляют 0,02 мл пунктата (разведение 1 : 200). Чтобы определить число миелокариоцитов (всех ядросодержащих клеток стернального пунктата), в другую пробирку с 2 мл жидкости Тюрка вносят 0,02 мл пунктата (разведение 1 : 100). Клетки подсчитывают обычным методом в счетной камере Горяева.
Получение и исследование пунктата селезенки. Применяют иглы ИС-2 или длинную иглу с мандреном. У крупного рогатого скота пунктат получают с левой стороны в двенадцатом межреберье на уровне линии маклока или непосредственно за последним ребром. Место пункции депилируют и дезинфицируют 70%-м спиртом. Применяют местное обезболивание. Проколов кожу, игле придают направление вперед и внутрь (т.е. на правый локтевой бугор) и осторожно продвигают ее на 2—4 см. Шприцем быстро аспирируют пульпу селезенки. Пунктат помещают на часовое стекло и готовят мазки, которые фиксируют и окрашивают так же, как мазки крови (см. цв. вкл., рис. 22). Если пунктат густой, то его осторожно размазывают тонким слоем по предметному стеклу, по возможности стараясь не раздавить и не деформировать молодые клетки. Мазки можно готовить и по принципу отпечатков: кусочки ткани захватывают пинцетом или ватным тампоном и прикладывают к предметному стеклу. По окрашенным мазкам выводят стенограмму, подсчитывая для этого 200—500 клеток.
Миелограммы сельскохозяйственных животных (по Г. А. Симоняну, 1995)
251
Таблица 7.4
|
Клетки |
Крупный рогатый скот |
Лошадь |
Свинья |
Собака |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
Ретикулярные |
01 (0-0,1) |
1,1 |
1,2 |
1,2(1-1,5) |
|
Недифференцированные |
0,3 ±0,1 (0,2-0,8) |
— |
— |
— |
|
М иелобласты |
0,3 ±0,1 (0,2-0,6) |
1 |
1 |
0,3 (0,2-0,4) |
|
Промиелоциты |
1,4 ±0,2 (0,4-2) |
1,7 |
1,4 |
1 (0,8-1,2) |
|
Нейтрофильные: |
||||
|
миелоциты |
2,33±0,7 (1,6-3,1) |
4,3 |
3,8 |
2,5 (2-3) |
|
метамиелоциты |
2,60 ±0,5 (0,6-4,8) |
18,1 |
8,4 |
6 (4,8-8) |
|
палочкоядерные |
11,19±2,1 (9,1-18,6) |
8,9 |
30 |
11 (8-14) |
|
сегментоядерные |
13,88±3,2 (10,6-19,6) |
6,5 |
8 |
13,5(10-17) |
|
Итого нейтрофилов |
30±3,4 (27,6-39,2) |
39,5 |
51,6 |
33 |
|
Эозинофильные: |
||||
|
миелоциты |
18 ±0,9 (0,6-5) |
0,2 |
0,2 |
1,8 (1,5-2,1) |
|
метамиелоциты |
2,48 ±1,5 (0,4-4,5) |
2,3 |
1,1 |
5,5 (4-7) |
|
палочкоядерные |
6,13 ±2,7 (2,6-10,6) |
2,9 |
2,7 |
4 (2-6) |
|
сегментоядерные |
1,41 ±0,6 (0,1-2,2) |
— |
0,7 |
2,5 (0,4-4,5) |
|
Итого эозинофилов |
11,1 ±4,7(3,9-21,5) |
5,4 |
4,7 |
13,8 |
|
Базофилы |
0,2 ±0,1 (0,1-0,3) |
0,4 |
0,2 |
1 (0,8-1,3) |
|
Всего миелобластических клеток |
43 |
46,3 |
57,5 |
49,1 |
252
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
Проэритробласты |
0,45 ±0,2 (0,1-1) |
— |
— |
1 (0,8-1,3) |
|
Эритробласты |
3,55 +0,9(2,6-5) |
1,3 |
0,4 |
20(16-25) |
|
Нормобласты: |
||||
|
базофильные |
8,31 ±1,7 (5,1-17,5) |
3,5 |
2,4 |
— |
|
пол ихроматофил ьные |
17,82 ±1 (9,9-22,5) |
21,3 |
10,6 |
— |
|
оксифильные |
18,80+ 7,3 (14,1-28,2) |
16,5 |
11,2 |
— |
|
Всего эритробластических клеток |
47,3 |
42,6 |
24,6 |
43 |
|
Лимфоциты |
4,9 ±1,1 (3,2-10,2) |
7,8 |
15,2 |
4(2,5-5,5) |
|
Моноциты |
1,54±0,9 (0,3-2,8) |
1 |
1,2 |
1,5 (1-2) |
|
Плазматические |
1,3 ±0,4 (0,8-2,4) |
1,2 |
0,3 |
— |
|
Мегакариоциты |
0,2 ±0,2 (0,1-0,6) |
— |
— |
0,2 (0,1-0,3) |
При значительно увеличенной селезенке ее пункция небезопасна. Беспокойное поведение животного, смещение селезенки при пункции, использование толстой иглы могут привести к разрыву капсулы органа или крупного сосуда с последующим кровотечением и гибелью животного. Чтобы избежать осложнений, нужно строго соблюдать правила пункции селезенки.
Получение и исследование пунктата лимфатических узлов. При увеличении лимфатических узлов нередко прибегают к их пункции, что дает возможность определить характер изменений их клеточного состава и уточнить диагноз ряда системных заболеваний лимфатического аппарата — лимфолейкоза, лимфогранулематоза, лимфосарко- матоза, обнаружить метастазы опухолей.
При пункции узлов анестезию не применяют. Простую инъекционную иглу и шприц вместимостью 10—20 мл стерилизуют кипячением, высушивают в термостате.
Место прокола депилируют и дезинфицируют 70%-м спиртом. Подкожный лимфатический узел фиксируют левой рукой, а надетой на шприц иглой, которую держат в правой руке, прокалывают кожу и вводят в ткань лимфатического узла. Круговыми движениями кончика иглы обрывают кусочки ткани, что обеспечивает аспирацию необходимого количества пунктата. Цвет полученного пунктата желтоватый или красноватый. Из пунктата готовят мазки, высушивают их, окрашивают так же, как и мазки крови (см. цв. вкл., рис. 23). При микроскопическом исследовании в мазках подсчитывают 200—500 клеток, выводят аденограмму.
Контрольные вопросы и задания
- 1. Назовите особенности получения проб крови у разных видов животных.
- 2. Что входит в понятие «клинический анализ крови»?
- 3. Каково клиническое значение определения СОЭ?
- 4. Перечислите методы определения гемоглобина и его уровень у животных разных видов.
- 5. Назовите методы подсчета форменных элементов крови.
- 6. Каково количество форменных элементов крови у сельскохозяйственных животных разных видов?
- 7. Охарактеризуйте методы фиксации и окраски мазков крови.
- 8. Назовите способы выведения лейкограммы.
- 9. Какие патологические изменения эритроцитов можно выявить в мазках крови у животных?
- 10. Какие патологические изменения лейкоцитов вы знаете?
- 11. Какие изменения можно выявить в лейкограмме? Каково их клиническое значение?
- 12. Каковы особенности клеток крови птиц?
- 13. Охарактеризуйте лейкоцитарный профиль у животных разных видов.
- 14. Какова цель получения и исследования костного мозга?
- 15. Какова цель получения и исследования пунктатов селезенки и лимфатических узлов?
